后，江必旺博士本期带我们不难发现影响Protein A层析介质的多种参数，供广大新老用户学习，也欢迎各位在评论区留言讨论。

  Protein A是用于抗体第一步分离纯化，其性能影响抗体生产的效率，成本，纯度等等，因此抗体厂家对Protein A 介质的要求比较高。其关键点在Protein A 介质的载量，机械强度，耐碱性，常规使用的寿命，纯度和回收率，配基脱落及HCP的残留及产品的质量和稳定供应等等。介质载量：层析介质的载量是药厂选择的重要参数，

  载量越高，同样柱体积填料能处理更多的抗体料液，生产效率也就越高。但Protein A 亲和填料载量与柱保留时间有关，正常的情况是柱留时间越长，测试的载量越大，也就是说流动相速度越快载量越低，这还在于抗体在介质微球中的扩散速度受限造成的。抗体的纯化生产效率与流动相速度有关，速度越快生产效率越高，但速度越快载量越低，上样量越少，因此要平衡好载量和流速以达到最高生产效率。评估亲和介质载量要看，其载量是在什么样的流速下测试的，理想的介质是在高流速条件下具有较高的载量。这样有助于兼顾生产效率和产量；

  抗体回收率和纯度：一般来说Protein A亲和层析介质用于抗体分离纯化回收率都比较高（一般都高于90%以上），回收率越高，成本越低。另外纯化后抗体的纯度也是药厂重点考虑的因素，Protein A 亲和层析往往是用于第一步捕获，一步亲和层析就可以把纯度提高到95%以上，通过第一步纯化后抗体纯度越高，后续精细分离的压力越小。抗体回收率和纯度往往更Protein A配基种类有关系，不同厂家采用的配基不同，会影响收率和纯度。介质寿命及耐碱性：亲和层析介质比离子交换介质价格高很多，而且常规使用的寿命又比离子交换介质短很多，使得亲和层析介质在抗体的纯化介质中占据80%成本。因此亲和层析介质的寿命是抗体厂家要考虑的另外一个重要参数。

  高效服役时间的长短会在某些特定的程度上影响纯化的经济性，也能从某一些程度上避免更换填料带来的潜在问题；另外药物生产的全部过程中，氢氧化钠被大范围的使用在层析介质及系统的清洗、消毒及存储等过程。采用氢氧化钠再生可避免不同cycle间的蛋白及核酸的交叉污染，也可大大降低Bioburden。当浓度大于0.1M时，可有效灭活Murine Leukemia Virus等病毒，杀灭细菌及芽孢杆菌，降低内毒素水平。因此Protein A 亲和层析介质的耐碱性对其寿命及纯化抗体的质量具有重大意义。一般Protein A 亲和层析介质需要耐受0.5 M NaOH溶液清洗，且在经过100 Cycles清洗后，动态载量仍要维持在95%以上；

  大量的微生物如酵母细菌可干扰层析过程，同时能造成筛板堵塞等问题，更重要的是微生物产生的内毒素和蛋白酶严重污染纯化料液。氢氧化钠可有效抑制、杀灭酵母及细菌等微生物。数据见下表。

  内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁成分，主要是类脂多糖，也被称作热源。注射药物中含有纳克级含量即可使人体产生寒颤，高热甚至休克等不良反应。GMP生产的各环节严控热源，层析过程也是重点监控步骤。采用氢氧化钠对层析系统及填料进行

  机械强度：高机械强度的介质耐压性好，耐受更高的流速，来提升生产效率，缩短纯化周期；另外高机械强度填料可装填更长柱子，来提升批次处理量；高机械强度介质能够大大减少碎片避免筛板堵塞，降低压力；还有高机械强度的介质可以上高浓度，高粘度的样品；最后高机械强度有利于放大生产，越大的柱子，对介质机械强度要求越高，因此高机械强度的介质在大规模层析纯化过程中越不容易给压塌，能保证生产的安全性。

  Protein A层析介质除了要考虑载量，机械强度，耐碱性及寿命外，还应该要考虑Protein A的 脱落及内毒素的控制及生产的批次稳定性等。下期，江必旺博士将为我们大家带来“Protein A 亲和层析介质的制备方法”干货文章，敬请期待。

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